Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO PP1β (m): sc-422378
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- PP1β Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique PP1β, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PP1β Antibody (A-6): sc-365678
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO PP1β (m) | sc-422378 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Ppp1cb code la protéine phosphatase 1 bêta (PP1β), une sous-unité catalytique de la protéine phosphatase 1 sérine/thréonine qui contrebalance la signalisation des kinases en déphosphorylant divers substrats de manière dépendante du contexte. PP1β participe à la régulation de la progression du cycle cellulaire, de la dynamique du cytosquelette et du contrôle métabolique, via l’assemblage en holoenzyme avec des sous-unités de ciblage et des sous-unités inhibitrices qui déterminent la localisation subcellulaire et la spécificité des substrats. Dans les systèmes murins, la phosphorégulation liée à PP1β est couramment étudiée dans des voies contrôlant l’organisation de la chromatine, la sortie de mitose et la signalisation en réponse au stress. Une activité PP1 dérégulée et des complexes contenant PP1β altérés sont fréquemment examinés pour leur rôle dans la prolifération aberrante, des processus neurobiologiques et des phénotypes cardiométaboliques, en tant que corrélats mécanistiques dans des modèles de maladie.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PP1β (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ppp1cb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ppp1cb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ppp1cb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PP1β.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ppp1cb pour l'étude de la signalisation de PP1β, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Ppp1cb essentiels à la fonction de PP1β
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ppp1cb pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le PP1β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PP1β plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ppp1cb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le PP1β plasmide HDR (m) et le PP1β (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ppp1cb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ppp1cb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.