Plasmide Double Nickase (h) PP1α: sc-400318-NIC

PPP1CA code la sous-unité catalytique, isoforme alpha, de la protéine phosphatase 1 (PP1α), une phosphatase majeure des sérines/thréonines qui inverse des événements de phosphorylation au sein de divers programmes cellulaires. L'activité de PP1α est dirigée par des sous-unités régulatrices afin de contrôler le métabolisme du glycogène, la progression du cycle cellulaire, la dynamique de la chromatine et l'organisation du cytosquelette, en contrebalançant la signalisation portée par les kinases. Par la déphosphorylation de substrats clés, PPP1CA contribue à coordonner les réponses aux dommages de l'ADN, la sortie de mitose et la régulation transcriptionnelle. Une signalisation PP1 dérégulée et des interactions phosphatase–régulateur altérées ont été associées à une prolifération aberrante et à une signalisation de stress observées dans plusieurs états cellulaires liés à des maladies, ce qui soutient son étude dans des modèles mécanistiques centrés sur les voies de signalisation.

PP1α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PPP1CA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PPP1CA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PPP1CA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PPP1CA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.