Particules Lentivirales d'Activation (h) POT1: sc-403275-LAC

POT1 humain (protection of telomeres 1) code un composant central du complexe shelterin, qui se fixe sur le surplomb télomérique 3′ simple brin, limitant une signalisation aberrante des dommages à l’ADN dépendante d’ATR et régulant l’accès de la télomérase. En coordonnant le coiffage des télomères, la maturation des extrémités et la progression de la fourche de réplication à travers les répétitions télomériques, POT1 contribue à préserver l’intégrité des extrémités chromosomiques et la stabilité du génome. L’altération de la fonction de POT1 est associée à un dysfonctionnement télomérique, à une homéostasie de la longueur des télomères perturbée et à une instabilité chromosomique accrue, des processus pertinents pour l’étude de la prédisposition tumorale et de la biologie liée aux hémopathies malignes et aux cancers cutanés. POT1 est donc largement utilisé comme point d’entrée pour explorer les voies de réponse aux dommages de l’ADN, le stress de réplication au niveau de l’ADN répétitif et les mécanismes contrôlant le maintien des télomères.

Les particules d'activation lentivirales POT1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de POT1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales POT1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription POT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de POT1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif POT1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.