Plasmide CRISPR d'Activation (h) POMC: sc-400592-ACT

Le gène humain **POMC** code la pro-opiomélanocortine, une prohormone neuroendocrine qui est clivée par protéolyse en plusieurs peptides bioactifs, dont l’**ACTH** et les **hormones stimulantes des mélanocytes** (MSH). Ces peptides signalent via les récepteurs mélanocortines pour réguler le contrôle hypothalamique de l’appétit et de l’équilibre énergétique, coordonner l’activité de l’axe hypophyso-surrénalien et influencer la pigmentation ainsi que les réponses au stress. L’expression de **POMC** et la maturation de ses peptides sont étroitement liées à des programmes transcriptionnels dépendants de l’AMPc/PKA et à une maturation dans les voies sécrétoires dépendante des convertases de prohormones. La dérégulation des voies **POMC** est associée à des troubles de l’homéostasie énergétique, de la fonction surrénalienne et de la biologie de la pigmentation, ce qui en fait une cible centrale pour les études mécanistiques de la signalisation neuroendocrine.

POMC Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de POMC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

POMC Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus POMC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription POMC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de POMC. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus POMC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de POMC au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie POMC dans les cellules tumorales présentant une expression de POMC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.