Partículas Lentivirales de Activación (h) POLR3GL: sc-413599-LAC

POLR3GL codifica una subunidad central de la ARN polimerasa III que contribuye a la transcripción de pequeños ARN no codificantes, incluidos los ARNt, el ARNr 5S y otros transcritos dependientes de la Pol III, esenciales para la capacidad de síntesis proteica y la homeostasis celular. Mediante la regulación de la producción de Pol III, POLR3GL influye en programas relacionados con el crecimiento, en respuestas al estrés celular y en vías de detección inmunitaria innata vinculadas a especies de ARN citosólicas. La función alterada de la Pol III y la biogénesis desregulada de pequeños ARN se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con mecanismos más amplios relevantes para el control transcripcional en tejidos proliferativos y metabólicamente activos. Por lo tanto, POLR3GL sirve como un nodo útil para investigar la regulación transcripcional de la Pol III, el metabolismo del ARN y los efectos posteriores sobre las transiciones de estado celular.

Las partículas de activación lentiviral POLR3GL (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de POLR3GL en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral POLR3GL (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción POLR3GL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de POLR3GL. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo POLR3GL y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.