POL H Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-401794-KO-2

Descripción general

POLH codifica la ADN polimerasa eta (Pol η), una polimerasa de síntesis por translesión (TLS) de la familia Y que permite el bypass preciso de los dímeros de pirimidina ciclobutano inducidos por UV durante la replicación del ADN. Actúa dentro de las respuestas de tolerancia al daño del ADN y al estrés replicativo, coordinándose con el antígeno nuclear de células en proliferación (PCNA) y con el cambio dependiente de ubiquitina desde las polimerasas replicativas hacia polimerasas TLS especializadas. La pérdida o disfunción de Pol η compromete la estabilidad del genoma y aumenta la mutagénesis inducida por UV, lo que vincula a POLH con la variante de xeroderma pigmentoso (XP-V) y con mecanismos más amplios de carcinogénesis impulsados por defectos en la reparación del ADN. Dado que POLH se sitúa en la intersección entre el procesamiento de lesiones asociado a la reparación por escisión de nucleótidos y la adaptación del punto de control de la fase S, se estudia con frecuencia en vías que regulan las firmas mutacionales y la dinámica de las horquillas de replicación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO POL H (h2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen POLH en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del POLH junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de POLH tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína POL H.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en POLH para la investigación de la señalización de POL H, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de POLH críticos para la función de POL H
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de POLH para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido POL H CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido POL H CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus POLH. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR POL H (h) y el plásmido HDR POL H (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología POLH para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana POLH definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.