Plasmide Double Nickase (h) Podocalyxin-like 1: sc-400317-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Podocalyxin-like 1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Podocalyxin-like 1 Double Nickase (h) et le plasmide Podocalyxin-like 1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PODXL. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Podocalyxin-like 1 Antibody (4F10): sc-23903
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Podocalyxin-like 1 | sc-400317-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Podocalyxin-like 1 | sc-400317-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PODXL code la podocalyxin-like 1, une sialomucine fortement glycosylée localisée à la surface apicale des cellules épithéliales et dans des structures spécialisées telles que les pédicelles des podocytes. Par ses interactions avec les protéines ERM et des protéines d’échafaudage, notamment NHERF, PODXL relie la membrane plasmique au cytosquelette d’actine afin de réguler la polarité cellulaire, l’adhésion et la motilité, et peut influencer la signalisation des GTPases de la famille Rho ainsi que le remodelage du cytosquelette. La podocalyxin-like 1 contribue au maintien des propriétés de barrière et aux processus morphogénétiques en modulant les interactions cellule–cellule et cellule–matrice. Une expression ou une localisation altérée de PODXL a été associée à des modifications de l’architecture tissulaire et à des phénotypes invasifs dans plusieurs contextes pathologiques, ce qui soutient son utilisation comme marqueur et comme nœud mécanistique dans les études de l’organisation épithéliale et du comportement des cellules tumorales.
Podocalyxin-like 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PODXL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PODXL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PODXL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PODXL.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.