Plasmide CRISPR d'Activation (h) Podocalyxin-like 1: sc-400317-ACT

PODXL code la podocalyxin‑like 1, une sialomucine de la famille CD34 fortement glycosylée, localisée à la surface apicale des épithéliums polarisés et de l’endothélium vasculaire. Grâce à ses propriétés anti‑adhésives et à ses interactions avec les protéines de liaison à l’actine NHERF/ezrin, PODXL contribue à la forme cellulaire, à la formation de la lumière et à la régulation de l’équilibre entre adhérence et motilité, en influençant l’organisation du cytosquelette et les programmes de polarité épithéliale. La podocalyxin‑like 1 a été impliquée dans des processus associés à la transition épithélio‑mésenchymateuse, à la migration et à l’invasion, et les modifications de son expression sont fréquemment étudiées dans le cadre de la progression tumorale et des phénotypes métastatiques. Dans le rein, PODXL est un marqueur clé des podocytes et joue un rôle dans l’intégrité de la barrière glomérulaire ainsi que dans la morphodynamique des podocytes.

Podocalyxin-like 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PODXL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Podocalyxin-like 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PODXL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PODXL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Podocalyxin-like 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PODXL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Podocalyxin-like 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Podocalyxin-like 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PODXL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.