Plasmide CRISPR d'Activation (h) POD-1: sc-402890-ACT

TCF21 code le facteur de transcription de type hélice-boucle-hélice basique (bHLH) POD-1, un régulateur déterminant de la lignée cellulaire qui coordonne des programmes de différenciation mésenchymateuse et le développement des organes, notamment des lignées stromales épicardiques, rénales et gonadiques. POD-1 module des réseaux transcriptionnels qui recoupent les transitions épithélio-mésenchymateuses, le remodelage de la matrice extracellulaire et le contrôle du cycle cellulaire, via des interactions dépendantes du contexte avec d’autres facteurs bHLH et des voies de signalisation du développement. Dans les tissus adultes, une expression altérée de TCF21 est liée à des changements des états d’activation des fibroblastes et au remodelage du stroma, affectant des programmes géniques pertinents pour l’homéostasie tissulaire. La dérégulation de TCF21/POD-1 a été associée à une reprogrammation transcriptionnelle pertinente pour le cancer ainsi qu’à des phénotypes de fibrose ou de remodelage, ce qui en fait un outil utile pour étudier la biologie stromale et les réseaux géniques associés à la différenciation.

POD-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TCF21 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

POD-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TCF21 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TCF21, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de POD-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TCF21 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de POD-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie POD-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TCF21 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.