Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PNMTase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406591
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PNMTase El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PNMTase, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PNMTase Anticuerpo (C-7): sc-393995
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PNMTase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406591 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PNMT (feniletanolamina N-metiltransferasa) codifica la PNMTasa, la enzima final en la biosíntesis de catecolaminas que cataliza la conversión de noradrenalina en adrenalina utilizando S-adenosil-L-metionina como donador de metilo. La actividad de la PNMTasa vincula la señalización neuroendocrina de la médula suprarrenal y del sistema simpático con las respuestas celulares al estrés, integrándose con programas transcripcionales regulados por glucocorticoides y con el metabolismo más amplio de la tirosina. Al modular la disponibilidad de adrenalina, PNMT influye en vías de señalización posteriores mediadas por receptores adrenérgicos que afectan procesos cardiovasculares, metabólicos y neuroconductuales. La expresión o regulación alterada de PNMT se ha asociado con una homeostasis de catecolaminas desregulada en fenotipos relacionados con el estrés y en contextos de enfermedad endocrina/neuropsiquiátrica.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PNMTase (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PNMT en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PNMT junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PNMT tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PNMTase.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PNMT para la investigación de la señalización de PNMTase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PNMT críticos para la función de PNMTase
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PNMT para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PNMTase CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PNMTase CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PNMT. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PNMTase (h) y el plásmido HDR PNMTase (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PNMT para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PNMT definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.