PMPCB Double Nickase Plasmid (h): sc-405207-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PMPCB Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PMPCB Double-Nickase-Plasmid (h) und PMPCB Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PMPCB abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PMPCB Double Nickase Plasmid (h) | sc-405207-NIC | 20 µg | $410.00 |
PMPCB kodiert die katalytische Beta-Untereinheit der mitochondrialen Prozessierungspeptidase (MPP), einer zentralen Protease, die nach dem Import in die mitochondriale Matrix N‑terminale Targeting-Präsequenzen von nukleär kodierten Proteinen abspaltet. Dieser Prozessierungsschritt ist essenziell für die Reifung mitochondrialer Proteine, die Biogenese der Atmungskette sowie die Aufrechterhaltung der oxidativen Phosphorylierung und der metabolischen Homöostase. Die Funktion von PMPCB überschneidet sich mit Signalwegen des mitochondrialen Imports und der Proteostase, einschließlich der Koordination mit TIM/TOM-Translokasen und Matrix-Chaperonen, die die Faltung und Assemblierung von Vorläuferproteinen steuern. Störungen der Präsequenz-Prozessierung werden mit Phänotypen mitochondrialer Dysfunktion in Verbindung gebracht und wurden mit neuroentwicklungsbedingten und neuromuskulären Krankheitsmechanismen assoziiert, die auf einem beeinträchtigten Energiestoffwechsel beruhen.
PMPCB Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PMPCB-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PMPCB abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PMPCB-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PMPCB-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.