Plasmide CRISPR d'Activation (h) PlGF: sc-402864-ACT

Le facteur de croissance placentaire (PGF) code PlGF, un membre sécrété de la famille VEGF qui signale principalement via VEGFR1/FLT1 afin de réguler l’angiogenèse, la perméabilité vasculaire et la survie des cellules endothéliales. PlGF participe à des programmes sensibles à l’hypoxie et à l’inflammation qui façonnent le remodelage vasculaire et le recrutement des cellules myéloïdes, en interaction avec l’activité des voies VEGF/VEGFR, PI3K–AKT et MAPK. Une expression dérégulée de PGF/PlGF a été associée à une néovascularisation aberrante et à des modifications du microenvironnement observées dans des contextes ischémiques et inflammatoires, ainsi qu’à une signalisation angiogénique associée aux tumeurs. En tant que facteur vasculaire lié à des biomarqueurs, PlGF est fréquemment étudié en biologie endothéliale, dans le développement placentaire et dans des modèles pertinents de croissance vasculaire pathologique.

PlGF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PGF sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PlGF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PGF dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PGF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PlGF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PGF natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PlGF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PlGF dans les cellules tumorales présentant une expression de PGF silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.