PlGF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402864-ACT

O fator de crescimento placentário (PGF) codifica o PlGF, um membro secretado da família VEGF que sinaliza principalmente por meio de VEGFR1/FLT1 para regular a angiogênese, a permeabilidade vascular e a sobrevivência de células endoteliais. O PlGF participa de programas responsivos à hipóxia e à inflamação que moldam a remodelação vascular e o recrutamento de células mieloides, interagindo com a atividade das vias VEGF/VEGFR, PI3K–AKT e MAPK. A expressão desregulada de PGF/PlGF tem sido associada à neovascularização aberrante e a alterações do microambiente observadas em contextos isquêmicos e inflamatórios, bem como à sinalização angiogênica associada a tumores. Como fator vascular ligado a biomarcadores, o PlGF é frequentemente estudado em biologia endotelial, desenvolvimento placentário e modelos relevantes de doença de crescimento vascular patológico.

PlGF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PGF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PlGF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PGF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PGF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PlGF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PGF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PlGF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PlGF em células tumorais com expressão de PGF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.