Plasmide CRISPR/Cas9 KO plexin-A3 (m): sc-422320

Présentation

Plxna3 code la plexine-A3, un récepteur transmembranaire des sémaphorines de classe 3, qui régule le guidage axonal, la migration neuronale et l’arborisation dendritique via la signalisation sémaphorine–neuropiline–plexine. La plexine-A3 intègre des signaux qui remodèlent le cytosquelette d’actine et de microtubules via les GTPases de la famille Rho et leurs effecteurs associés, influençant l’effondrement du cône de croissance et la motilité directionnelle. Au-delà du système nerveux, la plexine-A3 a été associée au contrôle de l’adhérence et du mouvement cellulaires, des processus pertinents pour la mise en place des patrons développementaux et l’organisation tissulaire. Une dérégulation des voies sémaphorine/plexine a été associée à des anomalies du neurodéveloppement et à des phénotypes migratoires altérés dans des modèles pertinents pour l’étude des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO plexin-A3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Plxna3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Plxna3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Plxna3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine plexin-A3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Plxna3 pour l'étude de la signalisation de plexin-A3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Plxna3 essentiels à la fonction de plexin-A3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Plxna3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le plexin-A3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le plexin-A3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Plxna3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le plexin-A3 plasmide HDR (m) et le plexin-A3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Plxna3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Plxna3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.