PLEKHA5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-408239
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PLEKHA5 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im PLEKHA5-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PLEKHA5: sc-390311
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PLEKHA5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-408239 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
PLEKHA5 kodiert ein Adaptorprotein mit Pleckstrin-Homology-Domäne, das an membrannaher Signalübertragung und der Organisation des Zytoskeletts beteiligt ist und so die räumliche Kontrolle von Proteinkomplexen in polarisierten Zellen unterstützt. Durch die Kopplung phosphoinositidreicher Membrandomänen an regulatorische Faktoren wird PLEKHA5 mit Prozessen wie vesikulärem Transport, Zellmorphologie und kontextabhängiger Modulation proliferativer Signalwege in Verbindung gebracht. Veränderte PLEKHA5-Expression oder -Regulation wurde in Krebsgenomik- und Expressionsstudien beschrieben, was mit Rollen in der Zellzykluskontrolle und migratorischen Phänotypen vereinbar ist. Diese Eigenschaften machen PLEKHA5 zu einem nützlichen Ziel, um membranabhängige Signal-Knotenpunkte zu untersuchen, die Wachstum und Zellverhalten beeinflussen.
Das PLEKHA5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PLEKHA5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PLEKHA5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PLEKHA5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PLEKHA5-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PLEKHA5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PLEKHA5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf PLEKHA5-Exone abzielen, die für die PLEKHA5-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere PLEKHA5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom PLEKHA5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PLEKHA5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PLEKHA5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PLEKHA5 HDR-Plasmid (h) und PLEKHA5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PLEKHA5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PLEKHA5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.