PLEKHA5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408239

Descripción general

PLEKHA5 codifica un adaptador que contiene un dominio de homología de pleckstrina, asociado a la señalización próxima a la membrana y a la organización del citoesqueleto, lo que favorece el control espacial de complejos proteicos en células polarizadas. Al acoplar dominios de membrana ricos en fosfoinosítidos con factores reguladores, PLEKHA5 se ha vinculado a procesos como el tráfico vesicular, la morfología celular y la modulación dependiente del contexto de la señalización proliferativa. Se han descrito alteraciones en la expresión o la regulación de PLEKHA5 en estudios de genómica y expresión en cáncer, en consonancia con funciones en el control del ciclo celular y fenotipos migratorios. Estas características hacen de PLEKHA5 una diana útil para diseccionar nodos de señalización dependientes de la membrana que influyen en el crecimiento y el comportamiento celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PLEKHA5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PLEKHA5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PLEKHA5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PLEKHA5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PLEKHA5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PLEKHA5 para la investigación de la señalización de PLEKHA5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PLEKHA5 críticos para la función de PLEKHA5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PLEKHA5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PLEKHA5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PLEKHA5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PLEKHA5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PLEKHA5 (h) y el plásmido HDR PLEKHA5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PLEKHA5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PLEKHA5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.