Plasmide Double Nickase (h) Plectin: sc-401494-NIC

PLEC code la plectine, une grande protéine « cytolinker » qui relie les filaments intermédiaires à l’actine, aux microtubules et à des complexes associés à la membrane, afin de stabiliser l’architecture cellulaire sous contrainte mécanique. La plectine organise les hémidesmosomes, les adhérences focales et les réseaux associés aux desmosomes, soutenant l’intégrité épithéliale, la résistance des fibres musculaires et l’organisation du cytosquelette neuronal. Grâce à ces fonctions d’échafaudage, la plectine influence des processus tels que l’adhérence cellulaire, la migration, la mécanotransduction et le maintien de la dynamique du cytosquelette. Une dérégulation ou des mutations de PLEC sont associées à des pathologies touchant l’intégrité de la peau et des muscles et ont été étudiées dans le contexte de l’invasion des cellules cancéreuses et de modifications de la mécanique tissulaire.

Plectin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PLEC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PLEC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PLEC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PLEC.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.