PLC β3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401181

Übersicht

PLCB3 kodiert die Phospholipase C beta 3 (PLCβ3), einen membranassoziierten Effektor stromabwärts von GPCR- und bestimmten Rezeptor-Tyrosinkinase-Signalen, der PIP2 hydrolysiert und dabei die Second Messenger IP3 und DAG erzeugt. Diese Reaktion treibt die intrazelluläre Ca2+-Mobilisierung und die Aktivierung der Proteinkinase C an und formt Signaltransduktionsprogramme, die Proliferation, Migration, Sekretion und die Funktion von Immunzellen regulieren. Die Aktivität von PLCβ3 integriert sich in die Calcium-Signalgebung, MAPK-Kaskaden und zytoskelettales Remodeling und verknüpft extrazelluläre Reize mit transkriptionellen und metabolischen Antworten. Eine dysregulierte, PLCB3-assoziierte Signalübertragung wurde in onkogenen und entzündlichen Kontexten beschrieben, was PLCB3 zu einem nützlichen Knotenpunkt macht, um die Verschaltung von Signalwegen in krankheitsrelevanten Zellmodellen zu untersuchen.

Das PLC β3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PLCB3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PLCB3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PLCB3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PLC β3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PLCB3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PLC β3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PLCB3-Exone abzielen, die für die PLC β3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PLCB3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PLC β3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PLC β3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PLCB3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PLC β3 HDR-Plasmid (h) und PLC β3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PLCB3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PLCB3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.