Plasmide CRISPR d'Activation (h) plakophilin 1: sc-403577-ACT

PKP1 code la plakophiline 1, une protéine à répétitions armadillo qui se localise aux desmosomes et soutient l’adhésion cellulaire calcium-dépendante en stabilisant les complexes cadhérine desmosomale–plakoglobine et en reliant les plaques jonctionnelles aux filaments intermédiaires. Cette activité d’échafaudage contribue au maintien de l’intégrité épithéliale, de la fonction barrière et de la résistance mécanique des tissus stratifiés, avec des rôles supplémentaires rapportés dans l’organisation du cytosquelette et la signalisation jonctionnelle. Une expression altérée de PKP1 ou une mauvaise localisation jonctionnelle peut perturber l’assemblage des desmosomes et la différenciation épithéliale, contribuant à des phénotypes de fragilité cutanée et à une architecture tissulaire aberrante. En tant que facteur associé aux desmosomes, PKP1 est largement étudié dans les voies qui régissent l’adhésion cellulaire, la morphogenèse tissulaire et les réponses épithéliales au stress.

plakophilin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PKP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

plakophilin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PKP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PKP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de plakophilin 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PKP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de plakophilin 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie plakophilin 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PKP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.