Plasmide CRISPR/Cas9 KO PLAA (m): sc-422286

Présentation

Plaa code pour la protéine activatrice de la phospholipase A2 (PLAA), un facteur cytosolique conservé impliqué dans la signalisation des phospholipides et la dynamique membranaire via la régulation de l’activité de la phospholipase A2 et de la production de médiateurs lipidiques dérivés de l’acide arachidonique. PLAA contient des domaines de liaison à l’ubiquitine et a été associée à des processus de contrôle de la qualité des protéines, notamment le trafic et le renouvellement, dépendants de l’ubiquitine, de protéines associées aux membranes. Par ces fonctions, PLAA peut influencer des cascades de signalisation inflammatoires, l’organisation endolysosomale et des voies sensibles au stress qui recoupent l’immunité innée et l’homéostasie cellulaire. La dérégulation de la signalisation lipidique et de la protéostasie médiée par l’ubiquitine est largement pertinente pour la neuroinflammation, des phénotypes métaboliques et des processus dégénératifs, faisant de Plaa un nœud utile pour des études mécanistiques dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PLAA (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Plaa dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Plaa, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Plaa à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PLAA.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Plaa pour l'étude de la signalisation de PLAA, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Plaa essentiels à la fonction de PLAA
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Plaa pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PLAA plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PLAA plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Plaa. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PLAA plasmide HDR (m) et le PLAA (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Plaa pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Plaa définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.