Plasmide CRISPR/Cas9 KO PLA2R (m): sc-422280

Présentation

Pla2r1 code PLA2R, un récepteur de lectine de type C transmembranaire de type I qui se lie aux phospholipases A2 sécrétées et contribue à la capture extracellulaire des ligands ainsi qu’à l’endocytose médiée par récepteur. En régulant l’internalisation des ligands et les signaux associés à la membrane, PLA2R influence, selon le contexte, la disponibilité des médiateurs lipidiques, le tonus inflammatoire et les interactions cellule–matrice. Dans les tissus murins, l’expression de Pla2r1 a été associée à la biologie immunitaire et stromale, avec une pertinence rapportée pour les processus inflammatoires et le remodelage fibrotique. Une activité altérée de la voie PLA2R est fréquemment étudiée dans des modèles de lésions d’organes et de réponses tissulaires pilotées par l’immunité, où la dynamique récepteur–ligand peut façonner des programmes transcriptionnels et métaboliques en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PLA2R (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pla2r1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pla2r1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pla2r1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PLA2R.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pla2r1 pour l'étude de la signalisation de PLA2R, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pla2r1 essentiels à la fonction de PLA2R
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pla2r1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PLA2R plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PLA2R plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pla2r1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PLA2R plasmide HDR (m) et le PLA2R (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pla2r1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pla2r1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.