Plasmide CRISPR/Cas9 KO PKR (rabbit): sc-437324

Présentation

PKR (EIF2AK2) est une kinase sérine/thréonine induite par l’interféron, capable de détecter l’ARN double brin et de coordonner les défenses antivirales innées. Une fois activée, PKR phosphoryle eIF2α afin d’inhiber la traduction dépendante de la coiffe, façonnant les réponses cellulaires au stress et modulant les programmes de signalisation de NF-κB et des IRF. L’activité de PKR influence l’apoptose, des réponses liées à l’inflammasome et le dialogue avec les voies MAPK, reliant la détection des agents pathogènes à un contrôle plus global de l’expression génique. Une signalisation PKR dérégulée a été associée à une inflammation chronique, à une susceptibilité accrue aux infections virales et à des altérations de la protéostasie pertinentes dans des modèles de neurodégénérescence et de stress métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PKR (rabbit) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires rabbit. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PKR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de PKR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de PKR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PKR plasmide CRISPR/Cas9 KO (rabbit) et le PKR plasmide CRISPR/Cas9 KO (rabbit2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PKR plasmide HDR (rabbit) et le PKR (rabbit2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.