PKLR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422273

Übersicht

Das Mausgen **Pklr** kodiert die Pyruvatkinase der Leber und der roten Blutkörperchen (**PKLR**), ein glykolytisches Enzym, das die Umwandlung von Phosphoenolpyruvat zu Pyruvat katalysiert und dabei gleichzeitig ATP erzeugt. Die PKLR-Aktivität trägt zur Steuerung des glykolytischen Flusses, der Pyruvatverfügbarkeit für den mitochondrialen Stoffwechsel und des zellulären Energiehaushalts bei – mit besonderer Bedeutung in erythroiden Zellen, in denen die Glykolyse eine dominante ATP-Quelle ist. Die Regulation von PKLR greift in nährstoffsensorische und transkriptionelle Programme ein, die den Kohlenhydratstoffwechsel prägen, darunter insulinresponsive und hypoxieadaptive Signalwege. Eine veränderte PKLR-Funktion ist mit metabolischen Störungen in roten Blutkörperchen und damit verbundenen Anämie-Phänotypen assoziiert, was **Pklr** zu einem geeigneten Ansatzpunkt macht, um in Mausmodellen Antworten auf metabolischen Stress und die Physiologie von Erythrozyten zu untersuchen.

Das PKLR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pklr-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pklr-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pklr nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PKLR-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pklr-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PKLR-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pklr-Exone abzielen, die für die PKLR-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pklr-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PKLR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PKLR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pklr-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PKLR HDR-Plasmid (m) und PKLR HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pklr-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pklr-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.