Plasmide CRISPR/Cas9 KO pki α (m): sc-422270

Présentation

Pkia code pour l’inhibiteur alpha de la protéine kinase (PKIα), un inhibiteur endogène de type pseudosubstrat qui se lie à la sous-unité catalytique de la protéine kinase A (PKA) dépendante de l’AMPc et limite la phosphorylation de cibles en aval. En modulant l’activité de la PKA, PKIα influence des processus régulés par l’axe AMPc/PKA, notamment le contrôle transcriptionnel (p. ex. la signalisation dépendante de CREB), le métabolisme, la différenciation et les réponses au stress. PKIα contribue également à ajuster les interactions (« cross-talk ») entre voies, notamment avec la voie MAPK et d’autres réseaux de kinases, via des modifications de la dynamique de phosphorylation. Une dérégulation de la signalisation AMPc–PKA a été impliquée dans divers mécanismes pertinents pour les maladies, tels qu’une croissance cellulaire aberrante, des phénotypes neurobiologiques et des altérations de la signalisation endocrine, faisant de Pkia un nœud utile pour des études mécanistiques dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO pki α (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pkia dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pkia, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pkia à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine pki α.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pkia pour l'étude de la signalisation de pki α, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pkia essentiels à la fonction de pki α
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pkia pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le pki α plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le pki α plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pkia. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le pki α plasmide HDR (m) et le pki α (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pkia pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pkia définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.