Plasmide CRISPR/Cas9 KO pki α (h): sc-416391

Présentation

PKIA code l’inhibiteur alpha de la protéine kinase (PKIα), un inhibiteur thermostable qui se lie à la sous-unité catalytique de la protéine kinase A (PKA) dépendante de l’AMPc et en supprime l’activité kinase. En limitant la signalisation AMPc/PKA, PKIα influence des programmes de phosphorylation qui contrôlent la régulation transcriptionnelle, la progression du cycle cellulaire, le métabolisme et les réponses au stress, notamment via la modulation de l’expression génique dépendante de CREB. PKIα contribue également au contrôle spatial de la signalisation de la PKA grâce à des interactions qui affectent la localisation de la kinase et l’amplitude du signal. Une activité dérégulée de la voie AMPc/PKA et une expression modifiée de PKIA ont été associées à des contextes pertinents pour la biologie tumorale, la signalisation endocrine et la fonction neuronale, ce qui soutient son utilisation dans des études mécanistiques centrées sur les voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO pki α (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PKIA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PKIA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PKIA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine pki α.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PKIA pour l'étude de la signalisation de pki α, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PKIA essentiels à la fonction de pki α
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PKIA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le pki α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le pki α plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PKIA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le pki α plasmide HDR (h) et le pki α (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PKIA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PKIA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.