pki α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-416391

Descripción general

PKIA codifica el inhibidor alfa de la proteína quinasa (PKIα), un inhibidor termoestable que se une a la subunidad catalítica de la proteína quinasa A (PKA) dependiente de AMPc y suprime la actividad quinasa. Al restringir la señalización AMPc/PKA, PKIα influye en los programas de fosforilación que controlan la regulación transcripcional, la progresión del ciclo celular, el metabolismo y las respuestas al estrés, incluida la modulación de la expresión génica dependiente de CREB. PKIα también contribuye al control espacial de la señalización de PKA mediante interacciones que afectan la localización de la quinasa y la amplitud de la señal. La actividad desregulada de la vía AMPc/PKA y la expresión alterada de PKIA se han asociado con contextos relevantes para la biología tumoral, la señalización endocrina y la función neuronal, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos centrados en la vía.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO pki α (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PKIA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PKIA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PKIA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína pki α.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PKIA para la investigación de la señalización de pki α, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PKIA críticos para la función de pki α
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PKIA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido pki α CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido pki α CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PKIA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR pki α (h) y el plásmido HDR pki α (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PKIA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PKIA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.