PKC gamma Plasmide Double Nickase (h): sc-400503-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PKC gamma Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PKC gamma Double Nickase Plasmid (h) e il PKC gamma Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PRKCG. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PKC gamma Antibody (C-4): sc-166385
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PKC gamma Plasmide Double Nickase (h) | sc-400503-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PKC gamma Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400503-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKCG codifica la proteina chinasi C gamma (PKCγ), una chinasi serina/treonina arricchita nei neuroni, attivata da Ca2+ e diacilglicerolo, che collega la segnalazione di membrana al controllo dell’eccitabilità e della funzione sinaptica dipendente dalla fosforilazione. PKCγ integra input a monte provenienti dalla segnalazione della fosfolipasi C per modulare il rimodellamento del citoscheletro, il traffico vescicolare e la trascrizione dipendente dall’attività, attraverso vie che intersecano MAPK/ERK e altre cascate chinasi. Nei tessuti umani, PRKCG è altamente espresso nel sistema nervoso centrale, dove alterazioni della segnalazione di PKCγ e varianti codificanti sono state associate a fenotipi neurodegenerativi e di neurosviluppo. La perturbazione sperimentale di PRKCG è comunemente impiegata per analizzare i meccanismi di trasduzione del segnale che regolano la plasticità neuronale, l’attività di rete e i cambiamenti del proteoma guidati dalla fosforilazione.
PKC gamma Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PRKCG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PRKCG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PRKCG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PRKCG interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.