Plasmide Double Nickase (h) PKC gamma: sc-400503-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PKC gamma correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PKC gamma Double Nickase (h) et le plasmide PKC gamma Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PRKCG. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PKC gamma Antibody (C-4): sc-166385
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PKC gamma | sc-400503-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PKC gamma | sc-400503-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKCG code la protéine kinase C gamma (PKCγ), une sérine/thréonine kinase enrichie dans les neurones, activée par le Ca2+ et le diacylglycérol, qui couple la signalisation membranaire à un contrôle de l’excitabilité et de la fonction synaptique dépendant de la phosphorylation. PKCγ intègre des signaux en amont issus des voies de la phospholipase C pour moduler le remodelage du cytosquelette, le trafic vésiculaire et la transcription dépendante de l’activité, via des voies qui recoupent la cascade MAPK/ERK et d’autres cascades de kinases. Dans les tissus humains, PRKCG est fortement exprimé dans le système nerveux central, où des altérations de la signalisation de PKCγ ainsi que des variations de la séquence codante ont été associées à des phénotypes neurodégénératifs et neurodéveloppementaux. La perturbation expérimentale de PRKCG est couramment utilisée pour disséquer les mécanismes de transduction du signal qui régissent la plasticité neuronale, l’activité des réseaux et les modifications du protéome induites par la phosphorylation.
PKC gamma Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PRKCG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PRKCG. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PRKCG. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PRKCG.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.