Plasmide CRISPR/Cas9 KO PKC beta (m): sc-422259
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- PKC beta Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique PKC beta, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PKC beta 1 Antibody (E-3): sc-8049
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO PKC beta (m) | sc-422259 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Prkcb code la protéine kinase C bêta (PKCβ), une kinase sérine/thréonine sensible au diacylglycérol et au Ca2+ qui relie la signalisation de la phospholipase C dépendante des récepteurs à des programmes de phosphorylation contrôlant la prolifération, l’apoptose et la différenciation. Dans les cellules immunitaires et hématopoïétiques de souris, PKCβ est un effecteur clé en aval de la signalisation du récepteur des cellules B (BCR), modulant l’activation des voies NF-κB et MAPK, le remodelage du cytosquelette et le trafic vésiculaire. PKCβ régule également les réponses endothéliales et des cellules musculaires lisses en modulant l’adhérence, la fonction de barrière et les voies du stress oxydatif. Une activité altérée de PKCβ a été associée à une dérégulation de la signalisation immunitaire et des processus inflammatoires, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques de phénotypes cardiométaboliques et vasculaires.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PKC beta (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Prkcb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Prkcb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Prkcb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PKC beta.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Prkcb pour l'étude de la signalisation de PKC beta, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Prkcb essentiels à la fonction de PKC beta
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Prkcb pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le PKC beta plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PKC beta plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Prkcb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le PKC beta plasmide HDR (m) et le PKC beta (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Prkcb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Prkcb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.