Plasmide CRISPR/Cas9 KO PKA Iα reg (m): sc-422400

Présentation

Prkar1a code la sous-unité régulatrice de type I alpha de la protéine kinase A (PKA) dépendante de l’AMPc, un régulateur négatif majeur qui se lie aux sous-unités catalytiques et freine l’activité de la kinase jusqu’à ce que l’AMPc induise la dissociation de l’holoenzyme. En contrôlant la signalisation PKA, PRKAR1A influence des programmes de phosphorylation qui régissent le métabolisme, la progression du cycle cellulaire, la différenciation et les réponses transcriptionnelles en aval des voies GPCR–adénylate cyclase–AMPc. Dans des modèles murins, la perturbation de Prkar1a modifie la dynamique de la voie AMPc/PKA, avec des effets en aval sur l’expression génique régulée par CREB et sur des interactions plus larges entre voies de signalisation, y compris des processus associés à la voie MAPK. La dérégulation de PRKAR1A et de la signalisation AMPc/PKA a été associée à des phénotypes endocriniens et de contrôle de la croissance, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier des mécanismes pathologiques dépendants de la signalisation in vivo et en culture cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PKA Iα reg (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Prkar1a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Prkar1a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Prkar1a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PKA Iα reg.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Prkar1a pour l'étude de la signalisation de PKA Iα reg, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Prkar1a essentiels à la fonction de PKA Iα reg
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Prkar1a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PKA Iα reg plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PKA Iα reg plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Prkar1a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PKA Iα reg plasmide HDR (m) et le PKA Iα reg (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Prkar1a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Prkar1a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.