Plasmide CRISPR/Cas9 KO PKAγ cat (h): sc-400874

Présentation

PRKACG code la sous-unité catalytique gamma de la protéine kinase A dépendante de l’AMPc (PKAγ), une kinase sérine/thréonine qui phosphoryle divers substrats afin de traduire les signaux AMPc en réponses cellulaires. Grâce à sa régulation par les sous-unités régulatrices de la PKA et les protéines d’ancrage des A-kinases (AKAP), PKAγ contribue à contrôler la compartimentation des signaux et module des processus tels que le métabolisme, les programmes transcriptionnels, la dynamique du cytosquelette et l’activité des canaux ioniques. Cette activité kinase s’inscrit à l’interface de la signalisation GPCR–adénylyl cyclase–AMPc et de voies en aval comme l’expression génique dépendante de CREB, ainsi que des interactions (« cross-talk ») avec les réseaux MAPK. Une dérégulation de la signalisation AMPc/PKA est impliquée dans plusieurs phénotypes pertinents pour les maladies, notamment une altération des signaux prolifératifs, des perturbations endocriniennes et métaboliques, et des changements de l’excitabilité neuronale, ce qui soutient des études mécanistiques de la fonction de PRKACG dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PKAγ cat (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PRKACG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PRKACG, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PRKACG à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PKAγ cat.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PRKACG pour l'étude de la signalisation de PKAγ cat, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PRKACG essentiels à la fonction de PKAγ cat
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PRKACG pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PKAγ cat plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PKAγ cat plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PRKACG. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PKAγ cat plasmide HDR (h) et le PKAγ cat (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PRKACG pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PRKACG définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.