Plasmide Double Nickase (h) PKAα cat: sc-400262-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PKAα cat correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PKAα cat Double Nickase (h) et le plasmide PKAα cat Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PRKACA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PKAα cat Antibody (A-2): sc-28315
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PKAα cat | sc-400262-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PKAα cat | sc-400262-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKACA code la sous-unité catalytique alpha de la protéine kinase A dépendante de l’AMPc (PKAα), un effecteur central de la signalisation GPCR–adénylate cyclase, qui phosphoryle de nombreux substrats contrôlant le métabolisme, l’activité des canaux ioniques, la transcription et la progression du cycle cellulaire. PKAα régule l’expression génique dépendante de CREB et s’intègre à des nœuds des voies MAPK, calcium et AKT pour façonner des réponses cellulaires spécifiques au contexte. Une activité aberrante de PRKACA est associée à une dérégulation de la signalisation de l’AMPc et a été impliquée dans la biologie tumorale endocrine et hépatique, l’hyperfonction surrénalienne et des programmes de différenciation altérés. En tant que kinase clé de l’axe AMPc/PKA, PRKACA est largement étudiée en transduction du signal, réponses au stress et cartographie des réseaux phosphoprotéomiques.
PKAα cat Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PRKACA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PRKACA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PRKACA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PRKACA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.