Plasmide Double Nickase (h) PIWIL2: sc-402211-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PIWIL2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PIWIL2 Double Nickase (h) et le plasmide PIWIL2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PIWIL2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) PIWIL2 | sc-402211-NIC | 20 µg | $410.00 |
PIWIL2 (PIWI-like RNA-mediated gene silencing 2) est une protéine Argonaute de la sous-famille PIWI qui se lie aux piARN pour réguler la stabilité des ARN et les états épigénétiques, avec des rôles majeurs dans le développement de la lignée germinale et le maintien de l’intégrité du génome. Elle participe à la répression des transposons médiée par la voie des piARN, au silençage génique post-transcriptionnel et à la régulation associée à la chromatine, limitant ainsi la mobilisation des éléments transposables et les dommages à l’ADN. Une expression aberrante de PIWIL2 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et est fréquemment étudiée en lien avec des programmes de type « cellules souches », une altération du contrôle du cycle cellulaire et une dérégulation des réseaux de petits ARN. PIWIL2 est donc pertinente pour l’étude des mécanismes de silençage guidés par l’ARN, de la régulation épigénétique et des voies de surveillance du génome dans les cellules humaines.
PIWIL2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PIWIL2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PIWIL2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PIWIL2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PIWIL2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.