Plasmide CRISPR d'Activation (h) PIWIL2: sc-402211-ACT

PIWIL2 (HIWI2) code une protéine Argonaute de la sous-famille PIWI, qui se lie aux piARN et contribue au silençage des éléments transposables guidé par de petits ARN, soutenant l’intégrité du génome dans les contextes germinaux et apparentés. En participant à la biogenèse des piARN et à la régulation épigénétique, PIWIL2 influence l’état de la chromatine, les profils de méthylation de l’ADN et le contrôle post-transcriptionnel des ARN cibles. Une expression aberrante de PIWIL2 a été rapportée dans de nombreux types de cancer et est fréquemment étudiée en lien avec des phénotypes de type cellules souches associés aux tumeurs, des programmes de prolifération et des réseaux de signalisation associés à la résistance. Ces caractéristiques font de PIWIL2 un nœud utile pour disséquer les voies de régulation génique médiées par l’ARN et de défense du génome dans les cellules humaines.

PIWIL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PIWIL2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PIWIL2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PIWIL2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PIWIL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PIWIL2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PIWIL2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PIWIL2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PIWIL2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PIWIL2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.