Plasmide CRISPR/Cas9 KO PITSLRE (m): sc-419583

Présentation

Cdk11b chez la souris code la kinase sérine/thréonine PITSLRE, un membre de la famille des kinases dépendantes des cyclines, impliqué dans la coordination de la progression du cycle cellulaire avec les programmes de transcription et de maturation de l’ARN. L’activité PITSLRE a été associée à la régulation de l’épissage du pré‑ARNm, au contrôle mitotique et à l’apoptose, contribuant au maintien de la protéostase et de l’intégrité du génome dans les cellules proliférantes. La perturbation des voies associées à PITSLRE peut modifier les réponses des points de contrôle et la signalisation de stress, des processus fréquemment étudiés dans des modèles de prolifération dérégulée et d’homéostasie tissulaire. En tant que nœud reliant la signalisation des kinases à la machinerie nucléaire d’expression génique, Cdk11b est pertinent pour les investigations mécanistes du contrôle de la croissance et des phénotypes cellulaires associés aux maladies dans des systèmes murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PITSLRE (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cdk11b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cdk11b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cdk11b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PITSLRE.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cdk11b pour l'étude de la signalisation de PITSLRE, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cdk11b essentiels à la fonction de PITSLRE
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cdk11b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PITSLRE plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PITSLRE plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cdk11b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PITSLRE plasmide HDR (m) et le PITSLRE (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cdk11b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cdk11b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.