Particules Lentivirales d'Activation (h) Pit-1: sc-401671-LAC

POU1F1 code Pit-1, un facteur de transcription POU à homéodomaine, spécifique de l’hypophyse, indispensable à la spécification des lignages de l’hypophyse antérieure et à l’expression des gènes hormonaux. Pit-1 intègre des programmes transcriptionnels développementaux et endocriniens en se liant à des éléments cis‑régulateurs afin de contrôler des gènes impliqués dans la différenciation des somatotrophes, lactotrophes et thyréotrophes, notamment les réseaux de régulation de l’hormone de croissance, de la prolactine et de la sous-unité β de la TSH (TSHβ). Une perturbation ou une régulation altérée de POU1F1 est associée à des défauts du développement hypophysaire et à des phénotypes de déficits combinés en hormones hypophysaires, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude du contrôle transcriptionnel de l’identité endocrine. L’activité de Pit-1 humain sert également de modèle pour cartographier la logique des enhancers, l’occupation de la chromatine et les interactions coopératives avec des cofacteurs qui façonnent les circuits de régulation génique hypophysaires.

Les particules d'activation lentivirales Pit-1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de POU1F1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Pit-1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription POU1F1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Pit-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif POU1F1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.