Partículas Lentivirales de Activación (h) PIPK I α: sc-403490-LAC

PIP5K1A codifica la fosfatidilinositol-4-fosfato 5-quinasa tipo I alfa (PIPK I α), una quinasa lipídica clave que genera fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato (PI(4,5)P2) en la membrana plasmática y en endomembranas. Al controlar los reservorios locales de PI(4,5)P2, PIPK I α regula la remodelación del citoesqueleto de actina, el tráfico de membranas y la señalización dependiente de fosfoinosítidos, incluidas las vías PI3K–AKT y las impulsadas por PLC, que influyen en la dinámica del calcio y en la producción de segundos mensajeros. La actividad de PIPK I α sustenta procesos como la migración celular, la adhesión y la endocitosis de receptores mediante la modulación de las adhesiones focales y de redes de pequeñas GTPasas. La desregulación del metabolismo de fosfoinosítidos que involucra a PIP5K1A se ha asociado con fenotipos proliferativos e invasivos alterados y se estudia con frecuencia en el contexto de la biología del cáncer, la señalización de células inmunitarias y la neurobiología.

Las partículas de activación lentiviral PIPK I α (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PIP5K1A en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PIPK I α (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PIP5K1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PIPK I α. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PIP5K1A y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.