Plasmide CRISPR/Cas9 KO Pinin (h2): sc-405373-KO-2
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Pinin Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h2) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Pinin, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Pinin Antibody (4FQ): sc-101127
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Pinin (h2) | sc-405373-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
PNN code la pinine, une protéine principalement nucléaire enrichie au niveau de complexes associés aux desmosomes et au sein de domaines de type « speckles », où elle fait le lien entre l’état d’adhésion cellule–cellule et l’organisation nucléaire. La pinine participe au traitement des pré-ARNm en interagissant avec des régulateurs de l’épissage et des composants du complexe de jonction des exons, influençant ainsi des programmes d’épissage alternatif liés à l’identité et à la différenciation épithéliales. Par ces fonctions, PNN affecte le contrôle transcriptionnel et post-transcriptionnel de gènes qui régissent la prolifération, la migration et les réponses au stress. Une dérégulation de l’expression de PNN ou des réseaux d’épissage a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux, ce qui étaye son intérêt pour l’étude des dynamiques épithélio-mésenchymateuses et des phénotypes induits par le traitement de l’ARN.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Pinin (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PNN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PNN, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PNN à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Pinin.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PNN pour l'étude de la signalisation de Pinin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de PNN essentiels à la fonction de Pinin
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PNN pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Pinin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Pinin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PNN. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Pinin plasmide HDR (h) et le Pinin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PNN pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PNN définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.