Plasmide Double Nickase (h) Pin1: sc-400485-NIC

Le gène humain **PIN1** code Pin1, une isomérase peptidyl-prolyl cis/trans dépendante de la phosphorylation, qui reconnaît les motifs Ser/Thr‑Pro et catalyse des changements conformationnels contrôlant la stabilité, la localisation et la sortie des voies de signalisation des protéines. Pin1 intègre les signaux issus de kinases dirigées vers la proline et module des voies centrales de la progression du cycle cellulaire, de la régulation transcriptionnelle, des réponses aux dommages de l'ADN et de la signalisation du stress via des substrats tels que la cycline D1, c‑Myc, p53 et tau. En remodelant les conformations des phosphoprotéines, Pin1 influence le renouvellement médié par l'ubiquitine et le contrôle des points de contrôle, reliant la dynamique de phosphorylation à la protéostasie. Une activité dérégulée de **PIN1** a été associée à des programmes de signalisation oncogènes et à des processus neurodégénératifs, ce qui en fait un nœud largement utilisé pour des études mécanistiques de la régulation dépendante de la phosphorylation.

Pin1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PIN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PIN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PIN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PIN1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.