Plasmide CRISPR d'Activation (h) Pin1: sc-400485-ACT

PIN1 code pour la peptidyl‑prolyl cis/trans isomérase NIMA‑interacting 1 (Pin1), une isomérase de proline dépendante de la phosphorylation qui reconnaît les motifs Ser/Thr‑Pro et remodèle ses protéines cibles après phosphorylation. En couplant un changement conformationnel à l’état des modifications post‑traductionnelles, Pin1 régule la progression du cycle cellulaire, les programmes transcriptionnels, la signalisation des dommages à l’ADN et la protéostasie à travers de multiples voies contrôlées par des kinases. L’activité de Pin1 peut influencer la stabilité et la fonction de régulateurs clés tels que p53, les cyclines et des facteurs de transcription, ce qui la relie au contrôle de la prolifération et des réponses au stress. Une expression ou une activité dérégulée de PIN1 a été associée à des signalisations oncogéniques et à des processus neurodégénératifs, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la régulation dépendante de la phosphorylation.

Pin1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PIN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Pin1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PIN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PIN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Pin1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PIN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Pin1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Pin1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PIN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.