Plasmide CRISPR d'Activation (h) Pim-3: sc-402784-ACT

PIM3 code pour Pim-3, une kinase sérine/thréonine constitutivement active de la famille PIM, qui intègre les signaux des cytokines et des facteurs de croissance afin de réguler la progression du cycle cellulaire, les voies de survie et le métabolisme cellulaire. Pim-3 module le contrôle, dépendant de la phosphorylation, des programmes apoptotiques et prolifératifs, en s’insérant dans des voies telles que JAK/STAT et des réseaux associés à PI3K/AKT qui influencent l’expression transcriptionnelle et la traduction. Une expression aberrante de PIM3 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et est souvent évaluée en parallèle de paramètres liés à la réponse au stress et à l’intégrité mitochondriale. Dans des modèles d’immunologie et de biologie du cancer, Pim-3 est utilisé pour étudier la plasticité des signalisations pilotées par les kinases, l’équilibre prolifération–apoptose et les interactions entre voies qui soutiennent des phénotypes adaptatifs.

Pim-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PIM3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Pim-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PIM3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PIM3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Pim-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PIM3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Pim-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Pim-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de PIM3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.