Pim-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422237

概要

マウスのPim1は、サイトカインおよび増殖因子シグナルによって誘導される恒常的に活性化したセリン／スレオニンキナーゼであるPim-1をコードしており、増殖・生存・代謝適応の制御に関与するとされています。Pim-1はJAK/STATおよびPI3K/AKTネットワークの出力と統合され、転写やタンパク質安定性に影響する下流エフェクターをリン酸化することで、細胞周期進行やアポトーシスを調節します。造血系および免疫細胞の文脈では、Pim-1はリンパ球の発生と活性化に寄与し、その制御異常は、発がん性シグナル、炎症、ストレス応答のモデルにおいてしばしば検討されます。さらにPim1はミトコンドリア機能や細胞老化における役割についても研究されており、キナーゼシグナルと組織恒常性を結び付ける機構的な関連を提供します。

Pim-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPim1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pim1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pim1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Pim-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Pim-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pim1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Pim-1の機能に不可欠なPim1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pim1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Pim-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPim-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pim1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Pim-1 HDRプラスミド（m）および Pim-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPim1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPim1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。