Pim-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422237

Übersicht

Das Mausgen **Pim1** kodiert **Pim-1**, eine konstitutiv aktive Serin/Threonin-Kinase, die durch Zytokin- und Wachstumsfaktorsignale induziert wird und an der Kontrolle von Proliferation, Überleben und metabolischer Anpassung beteiligt ist. Pim-1 integriert Signalausgänge der **JAK/STAT**- und **PI3K/AKT**-Netzwerke und moduliert Zellzyklusprogression und Apoptose durch die Phosphorylierung nachgeschalteter Effektoren, die Transkription und Proteinstabilität beeinflussen. In hämatopoetischen und immunologischen Kontexten trägt Pim-1 zur Lymphozytenentwicklung und -aktivierung bei; seine Fehlregulation wird häufig in Modellen onkogener Signalgebung, von Entzündungen und Stressantworten untersucht. Zudem wird Pim1 hinsichtlich seiner Rollen in der mitochondrialen Funktion und der zellulären Seneszenz erforscht und liefert damit mechanistische Verknüpfungen zwischen Kinase-Signalgebung und Gewebehomöostase.

Das Pim-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pim1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pim1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pim1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Pim-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pim1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Pim-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pim1-Exone abzielen, die für die Pim-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pim1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Pim-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Pim-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pim1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Pim-1 HDR-Plasmid (m) und Pim-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pim1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pim1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.