Plasmide CRISPR/Cas9 KO PIKE (h): sc-405344

Présentation

AGAP2 code pour PIKE, une GTPase multidomaine et protéine adaptatrice de signalisation qui couple les signaux issus des récepteurs aux facteurs de croissance à la signalisation de la phosphoinositide 3‑kinase (PI3K), influençant ainsi les voies dépendantes du PIP3 qui régulent la prolifération, la survie et la dynamique du cytosquelette. PIKE interagit avec des composants des cascades des récepteurs à activité tyrosine kinase et module des effecteurs en aval tels qu’AKT, affectant l’endocytose, le trafic vésiculaire et le remodelage de l’actine dans de multiples types cellulaires. Une activité dérégulée d’AGAP2/PIKE a été associée à des altérations de la signalisation oncogénique, des réponses au stress métabolique et des phénotypes invasifs, via des perturbations de l’architecture des réseaux centrés sur PI3K. Ces propriétés font d’AGAP2 un nœud utile pour disséquer l’intégration des signaux et le contrôle par rétroaction au sein des voies de croissance et de survie dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PIKE (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène AGAP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du AGAP2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert AGAP2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PIKE.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en AGAP2 pour l'étude de la signalisation de PIKE, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de AGAP2 essentiels à la fonction de PIKE
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de AGAP2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PIKE plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PIKE plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus AGAP2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PIKE plasmide HDR (h) et le PIKE (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie AGAP2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles AGAP2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.