PIEZO2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-412957-ACT

PIEZO2 kodiert einen mechanisch aktivierten, nichtselektiven Kationenkanal, der Membranspannung und Scherkräfte in calciumpermeable Ionenströme umsetzt. Er ist eine zentrale Komponente der Mechanotransduktion in sensorischen Neuronen und anderen mechanisch responsiven Zellen und beeinflusst die Membranerregbarkeit, die Calciumsignalgebung sowie nachgeschaltete aktivitätsabhängige Transkriptionsprogramme. Die Aktivität von PIEZO2 ist über mechanisch gesteuerte Ionenflüsse mit Signalwegen verknüpft, die die Berührungs- und Propriozeptionssignalgebung, die Neuritenfunktion und die Zytoskelettdynamik regulieren. Genetische und funktionelle Störungen von PIEZO2 wurden mit menschlichen sensorischen und neuromuskulären Phänotypen in Verbindung gebracht, was den Lokus für Studien zur mechanoelektrischen Kopplung und zur Biologie mechanosensorischer Schaltkreise besonders geeignet macht.

PIEZO2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PIEZO2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PIEZO2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PIEZO2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PIEZO2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PIEZO2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PIEZO2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PIEZO2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PIEZO2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PIEZO2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.