Plasmide CRISPR d'Activation (h) PICK1: sc-403683-ACT

PICK1 humain (protein interacting with C kinase 1) est une protéine d’échafaudage contenant des domaines PDZ et BAR, qui couple la détection de la courbure membranaire au trafic des récepteurs et à la transduction du signal. PICK1 régule l’endocytose, le recyclage et la localisation synaptique de diverses protéines membranaires, notamment les récepteurs du glutamate de type AMPA et des transporteurs, influençant la plasticité synaptique et la signalisation intracellulaire des kinases. Par ses rôles dans le trafic vésiculaire et l’organisation du cytosquelette, PICK1 participe à la communication neuronale et à des processus de transport polarisé dans plusieurs types cellulaires. Des voies associées à PICK1 dérégulées ont été étudiées dans le contexte de dysfonctionnements neurologiques et d’une homéostasie des récepteurs altérée, ce qui en fait un nœud utile pour l’étude des réseaux de signalisation à proximité de la membrane.

PICK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PICK1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PICK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PICK1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PICK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PICK1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PICK1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PICK1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PICK1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PICK1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.