PICH Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407026

Panoramica

ERCC6L codifica PICH, una traslocasi del DNA ATP-dipendente della famiglia SNF2 che si localizza sui ponti di DNA ultrafini durante l’anafase e promuove una corretta segregazione dei cromosomi. PICH coopera con la risposta al danno al DNA e con le vie di decatenazione rimodellando la cromatina e coordinando la risoluzione dei cromatidi fratelli intrecciati, sostenendo la stabilità del genoma in condizioni di stress replicativo. Regolando la progressione mitotica e prevenendo la mis-segregazione cromosomica, PICH influenza esiti cellulari legati all’aneuploidia e all’instabilità genomica. Un’attività deregolata di ERCC6L/PICH è stata associata a fenotipi proliferativi ed è oggetto di studio nel contesto della biologia del cancro e di altri disturbi correlati al mantenimento del genoma.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PICH (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ERCC6L in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ERCC6L insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ERCC6L a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PICH.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ERCC6L per lo studio della segnalazione di PICH, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ERCC6L critici per la funzione di PICH
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ERCC6L per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PICH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PICH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ERCC6L. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PICH Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PICH (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ERCC6L per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ERCC6L definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.