Plasmide CRISPR/Cas9 KO PICH (h): sc-407026

Présentation

ERCC6L code pour PICH, une translocase d’ADN dépendante de l’ATP de la famille SNF2, qui se localise sur les ponts d’ADN ultrafins pendant l’anaphase et favorise une ségrégation fidèle des chromosomes. PICH coopère avec la réponse aux dommages de l’ADN et les voies de décaténation en remodelant la chromatine et en coordonnant la résolution des chromatides sœurs entrelacées, soutenant ainsi la stabilité du génome en conditions de stress réplicatif. En régulant la progression mitotique et en empêchant une mauvaise ségrégation chromosomique, PICH influence des issues cellulaires liées à l’aneuploïdie et à l’instabilité génomique. Une activité dérégulée d’ERCC6L/PICH a été associée à des phénotypes prolifératifs et est étudiée dans le contexte de la biologie du cancer et d’autres troubles liés au maintien du génome.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PICH (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ERCC6L dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ERCC6L, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ERCC6L à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PICH.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ERCC6L pour l'étude de la signalisation de PICH, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ERCC6L essentiels à la fonction de PICH
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ERCC6L pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PICH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PICH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ERCC6L. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PICH plasmide HDR (h) et le PICH (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ERCC6L pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ERCC6L définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.