PI 4-kinase II α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405423

Descripción general

PI4K2A codifica la fosfatidilinositol 4-quinasa II alfa (PI 4-quinasa II alfa), una quinasa lipídica asociada a membrana que genera fosfatidilinositol 4-fosfato (PI4P) para apoyar la señalización de fosfoinosítidos y la identidad de membrana. El PI4P producido por PI4K2A contribuye al tráfico del aparato de Golgi y de endosomas, a la clasificación mediada por clatrina y a la conversión posterior de fosfoinosítidos, que influye en el transporte de receptores y en la dinámica de la señalización. A través de estas funciones en la biogénesis de vesículas y la remodelación de membranas, PI4K2A es relevante para estudios sobre la organización del sistema endomembranoso, la detección de nutrientes y las respuestas al estrés. Las alteraciones del metabolismo de fosfoinosítidos y de los programas de tráfico vinculados a PI4K2A se han asociado con mecanismos implicados en la biología del cáncer, la neurobiología y las interacciones huésped–patógeno.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PI 4-kinase II α (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PI4K2A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PI4K2A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PI4K2A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PI 4-kinase II α.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PI4K2A para la investigación de la señalización de PI 4-kinase II α, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PI4K2A críticos para la función de PI 4-kinase II α
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PI4K2A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PI 4-kinase II α CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PI 4-kinase II α CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PI4K2A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PI 4-kinase II α (h) y el plásmido HDR PI 4-kinase II α (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PI4K2A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PI4K2A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.