PI 3-kinase p85β Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401991-ACT

PIK3R2 codifica la subunità regolatoria p85β della fosfoinositide 3-chinasi (PI3K) di classe IA, un mediatore centrale della segnalazione dei recettori tirosin-chinasici e dell’asse insulina/IGF. Stabilizzando e modulando le isoforme catalitiche p110, la PI 3-chinasi p85β contribuisce a controllare la produzione di PIP3 e l’attività a valle della via AKT–mTOR, influenzando crescita cellulare, sopravvivenza, metabolismo e dinamiche del citoscheletro. Un’alterata regolazione della via PI3K è ampiamente implicata nella biologia del cancro, nel neurosviluppo e nella segnalazione immunitaria, rendendo PIK3R2 un nodo chiave per analizzare i feedback di via e l’ampiezza del segnale. L’espressione di PIK3R2 e le sue interazioni regolatorie sono inoltre rilevanti per studi sulla sensibilità insulinica, sulla migrazione e sulla segnalazione di risposta allo stress nelle cellule umane.

PI 3-kinase p85β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PIK3R2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PI 3-kinase p85β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PIK3R2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PIK3R2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PI 3-kinase p85β. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PIK3R2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PI 3-kinase p85β nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PI 3-kinase p85β nelle cellule tumorali con espressione di PIK3R2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.