Plasmide Double Nickase (h) PI 3-kinase p110α: sc-416642-NIC

PIK3CA code la sous-unité catalytique p110α de la phosphoinositide 3‑kinase (PI3K) de classe I, qui phosphoryle le PIP2 pour générer du PIP3 à la membrane plasmique. Cet événement de signalisation lipidique recrute et active AKT ainsi que des effecteurs en aval, dont mTOR, coordonnant le contrôle, induit par les facteurs de croissance, de la prolifération, du métabolisme, de la survie et de la dynamique du cytosquelette. La signalisation PI3K/AKT/mTOR s’articule avec les récepteurs à activité tyrosine kinase, RAS et des boucles de rétrocontrôle qui modulent les réponses cellulaires au stress et la détection des nutriments. Une activité altérée de PIK3CA est fréquemment étudiée dans des contextes de réseaux de signalisation dérégulés sous-jacents à la transformation oncogénique, à une utilisation modifiée du glucose et à une migration cellulaire aberrante.

PI 3-kinase p110α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PIK3CA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PIK3CA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PIK3CA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PIK3CA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.