Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO PI 3-kinase p100 (m): sc-432531
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- PI 3-kinase p100 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique PI 3-kinase p100, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PI 3-kinase p100 Antibody (F-11): sc-365404
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO PI 3-kinase p100 (m) | sc-432531 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Pik3c3 code la sous-unité catalytique de la phosphatidylinositol 3‑kinase de classe III (souvent appelée PI 3‑kinase p100/Vps34), qui génère le phosphatidylinositol‑3‑phosphate afin de contrôler l’identité des membranes endosomales et leur trafic. Dans les cellules de souris, la production de PI3P par cette kinase est centrale pour l’initiation de l’autophagie, la maturation endosome‑lysosome et le tri vésiculaire via des complexes avec des partenaires régulateurs tels que VPS15 et Beclin 1. L’activité de Pik3c3 intègre les signaux liés aux nutriments et au stress pour coordonner l’homéostasie lysosomale et le contrôle qualité cellulaire, influençant notamment la protéostasie, le renouvellement mitochondrial et la signalisation immunitaire. Les voies endolysosomales et d’autophagie dérégulées associées à la fonction de Pik3c3 sont fréquemment étudiées dans les contextes de la neurodégénérescence, de la biologie des infections et du métabolisme des cellules tumorales.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PI 3-kinase p100 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pik3c3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pik3c3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pik3c3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PI 3-kinase p100.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pik3c3 pour l'étude de la signalisation de PI 3-kinase p100, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Pik3c3 essentiels à la fonction de PI 3-kinase p100
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pik3c3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le PI 3-kinase p100 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PI 3-kinase p100 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pik3c3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le PI 3-kinase p100 plasmide HDR (m) et le PI 3-kinase p100 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pik3c3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pik3c3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.