Plasmide Double Nickase (m) PHT2: sc-425761-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) PHT2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PHT2 Double Nickase (m) et le plasmide PHT2 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Slc15a3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) PHT2 | sc-425761-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc15a3 code chez la souris le transporteur d’histidine/oligopeptides couplé aux protons PHT2, membre de la famille SLC15, qui contribue à la prise en charge endolysosomale des peptides et des acides aminés en conditions de pH acide. L’activité de PHT2 est liée au trafic vésiculaire, à la détection des nutriments associée aux lysosomes et aux processus de traitement de l’antigène qui influencent la signalisation immunitaire innée et adaptative. En modulant la disponibilité intracellulaire des peptides, Slc15a3 peut influer sur les réponses inflammatoires et les voies d’adaptation au stress dans des contextes cellulaires myéloïdes et épithéliaux. Une dérégulation des processus de transport endolysosomal impliquant PHT2 a été associée, dans des modèles expérimentaux, à des pathologies d’origine immunitaire et à des phénotypes de défense de l’hôte altérés.
PHT2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Slc15a3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Slc15a3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Slc15a3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Slc15a3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.