Plasmide CRISPR/Cas9 KO Phox2b (h): sc-401351

Présentation

PHOX2B code Phox2b, un facteur de transcription à homéoboîte de type « paired-like » qui orchestre le développement du système nerveux autonome et la différenciation des neurones noradrénergiques en contrôlant des programmes d’expression génique lors de la mise en place de la crête neurale et du patronnement du rhombencéphale. Phox2b régule des réseaux transcriptionnels impliqués dans la biosynthèse des catécholamines, la spécification neuronale et la maturation, en interagissant avec des voies qui orientent les décisions de destinée des progéniteurs neuraux et l’engagement de lignée du système nerveux périphérique. Une altération de la fonction de PHOX2B est fortement associée aux neurocristopathies, notamment le syndrome d’hypoventilation centrale congénitale, ainsi qu’à des tumeurs développementales d’origine crêtienne neurale telles que le neuroblastome, ce qui reflète son rôle dans l’établissement et le maintien de l’identité des neurones autonomes. En tant que régulateur définissant une lignée, PHOX2B constitue un nœud utile pour étudier le contrôle transcriptionnel du neurodéveloppement et les mécanismes de stabilité de l’état cellulaire et de reprogrammation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Phox2b (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PHOX2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PHOX2B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PHOX2B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Phox2b.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PHOX2B pour l'étude de la signalisation de Phox2b, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PHOX2B essentiels à la fonction de Phox2b
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PHOX2B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Phox2b plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Phox2b plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PHOX2B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Phox2b plasmide HDR (h) et le Phox2b (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PHOX2B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PHOX2B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.