Plasmide CRISPR/Cas9 KO PHIP (h): sc-407159

Présentation

PHIP (pleckstrin homology domain interacting protein) code une protéine d’échafaudage nucléaire et cytoplasmique qui s’associe à la signalisation des substrats du récepteur de l’insuline ainsi qu’à des complexes associés à la chromatine afin d’influencer les programmes transcriptionnels et la régulation des états cellulaires. Grâce à des interactions liées à la voie PI3K–AKT et à la régulation de l’expression génique, PHIP contribue au contrôle de la croissance cellulaire, des réponses métaboliques et de la progression du cycle cellulaire. Des altérations génétiques ou une expression dérégulée de PHIP ont été rapportées dans de nombreux cancers et sont étudiées pour leurs liens avec la prolifération des cellules tumorales, l’invasion et les phénotypes de réponse aux traitements. En outre, PHIP a été impliqué dans des troubles du neurodéveloppement, ce qui souligne sa pertinence dans des voies couplant des signaux en entrée à des réponses transcriptionnelles en sortie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PHIP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PHIP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PHIP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PHIP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PHIP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PHIP pour l'étude de la signalisation de PHIP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PHIP essentiels à la fonction de PHIP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PHIP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PHIP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PHIP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PHIP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PHIP plasmide HDR (h) et le PHIP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PHIP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PHIP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.