Plasmide Double Nickase (h) PHF5A: sc-407986-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PHF5A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PHF5A Double Nickase (h) et le plasmide PHF5A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PHF5A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PHF5A | sc-407986-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PHF5A | sc-407986-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PHF5A (PHD finger protein 5A) est un composant évolutivement conservé du sous-complexe SF3b du snRNP U2, et agit comme un adaptateur essentiel lors de l’épissage du pré-ARNm et de la reconnaissance des sites d’épissage au cours des premières étapes de l’assemblage du spliceosome. En stabilisant les interactions au niveau de la région du point de branchement, PHF5A favorise une excision précise des introns et influence des programmes d’épissage alternatif qui façonnent la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et les états de différenciation. Le dysfonctionnement du spliceosome et les dépendances aux facteurs d’épissage sont des caractéristiques récurrentes des systèmes cellulaires prolifératifs et adaptés au stress, ce qui fait de PHF5A un nœud pertinent pour étudier le contrôle de la maturation des ARN. La perturbation de PHF5A a été associée à une modification de l’équilibre des isoformes transcriptomiques et à un remodelage des voies en aval, ce qui est pertinent pour des modèles d’instabilité génomique et de signalisation oncogénique.
PHF5A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PHF5A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PHF5A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PHF5A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PHF5A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.